Cellufine凝膠過濾,或尺寸排阻,是一種簡單、高效的層析方法,用于蛋白或生物大分子的純化。但是,大多數(shù)凝膠過濾填料都只能在低流速下使用,且分辨率十分有限,因而,很難實(shí)現(xiàn)高通量的大規(guī)模的制備工作。
Cellufine GCL-2000,一種球形纖維素基的凝膠過濾填料,克服了傳統(tǒng)凝膠過濾填料的缺陷,機(jī)械穩(wěn)定性良好,分辨率高,因而,可在高流速下使用,更可用于大規(guī)模工業(yè)化柱的裝填和操作。
Cellufine GCL-2000,可用于分離分子量范圍分布很寬的復(fù)雜組分,特別適合于高分子量蛋白復(fù)合體的組分分離。
Cellufine GH-25,一種多孔的球形高交聯(lián)度纖維素基凝膠過濾填料,可用于蛋白的快速除鹽。3kD的排阻極限使得蛋白等大分子可以直接通過柱體,而小分子的鹽類溶解物在通過柱體的同時(shí),則還需經(jīng)過填料內(nèi)部的孔隙,滯后了洗脫的時(shí)間,從而達(dá)到了蛋白和鹽類溶解物的分離。Cellufine GH-25,具有良好的機(jī)械穩(wěn)定性,因而可在高流速下使用,不僅可用于裝填大直徑的制備柱,而且還大大減少了蛋白制備所需的時(shí)間。
按照涂層種類來分,默克的 TCL 板有以下五種:
1.Sillica gel 60 以及 Sillica gel 60 F254 ,此為硅膠板,TCL 中超過 90%的應(yīng)用是硅膠板;
其中 60 代表涂層的硅膠孔徑為 60;F254 表示涂層中含有熒光指示劑,此熒光指示劑在254nm 紫外光下發(fā)射綠光;此外,默克還有標(biāo)識為 F254S 的薄層板,它在 254nm 紫外光下發(fā)射藍(lán)光。
2.改性硅膠板,RP-8,RP-18,NH2,CN,DIOL。
RP-8,RP-18 是反相薄層板,其色譜行為和HPLC 的反相填料相近。但是在使用普通的反相 TLC 板時(shí),展開劑中的水含量不得超過 40%(這是由于發(fā)生毛細(xì)作用的填料孔的潤濕性有限);如果需要更高的水含量作展開劑,需
要選擇 RP-18W 的反相薄層板,這種涂層具有低的鍵合度,涂層表面有更多的殘余硅羥基。DIOL 板和硅膠板的選擇性非常相近,它具有比硅膠板弱的保留,而且分離不受相對濕度的影響。NH2 板適合于分離糖以及糖的衍生物,羥基化合物可以非常方便地在氨基板上檢測出來(在加熱的情況下形成了發(fā)藍(lán)色熒光的加合物)。
CN 板越來越多地用于正相分離,使用正己烷和極性有機(jī)改性劑作展開劑;同時(shí),CN 板也可以用于反相色譜分離。
3.Cellulose (F),纖維素板,適合于分離強(qiáng)極性的化合物如兒茶酚,食物色素以及氨基酸。
4.Aluminum Oxide,氧化鋁板,默克提供堿性和中性氧化鋁板,所有的玻璃板全部為堿性氧化鋁板,酸性氧化鋁板可以通過使用酸性展開劑用中性氧化鋁板制備。
5.Polyamide,聚酰胺薄層板。
按薄層板的基材來分可以分為玻璃板,鋁板和塑料板,其中鋁板由于其方便裁剪,價(jià)格便宜贏得用戶的青睞。
按薄層板涂層厚度來分,也可以說是按照分離的目的來分類,可以分為普通板(涂層厚度為0.20mm 或 0.25mm)和制備板(涂層厚度為0.5mm/1.0mm/1.5mm/2.0mm)。其中普通板用于獲得樣品的組成信息,而制備板用于純化樣
品以獲得高純度的產(chǎn)品,涂層的厚度可以根據(jù)待分離樣品量的進(jìn)行選擇。
薄層板的保存及使用注意事項(xiàng)
薄層板代表著一個(gè)開放的系統(tǒng),容易受到周圍環(huán)境的影響。如果板在儲(chǔ)存過程中保存不當(dāng),非常容易受到濕度、灰塵和煙霧的污染。同時(shí),由于 TCL 離線操作的特性,在每個(gè)獨(dú)立的步驟(點(diǎn)樣、展開、顯色衍生以及分離結(jié)果評價(jià))都要手工操作,因此需要特別小心以避免破壞 TCL敏感的涂層。
我們建議:在取拿薄層板時(shí)只拿板的邊緣,而不是觸及涂層表面,如果有需要,展開好的板子應(yīng)該僅僅拿捏溶劑前沿的那個(gè)邊緣。薄層板上的污染物不僅僅是富集的周圍空氣中雜質(zhì),薄層板的收縮性薄膜包裝也是雜質(zhì)的一個(gè)
來源。因此儲(chǔ)存在原始包裝的泡沫塑料盒中的最上面一塊板子應(yīng)該涂層朝下放置。如果我們發(fā)現(xiàn)板在紫外光下有暗的溶劑前沿,應(yīng)該考慮在使用前將板子“預(yù)清洗”(一般選擇甲醇或三氯甲烷或二者的混合溶液進(jìn)行預(yù)清洗)。?
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