常見天然類黃酮色素的分離純化及應(yīng)用實(shí)例?
類黃酮色素的應(yīng)用開發(fā)現(xiàn)狀
許多的天然類黃酮色素都是對(duì)人體有益的天然活性成分，具有抗氧化、預(yù)防心血管疾病、防癌、抗炎等多種生理功效，特別在醫(yī)藥方面，有良好的應(yīng)用和開發(fā)前景。
色素類黃酮化合物廣泛分布于植物界，幾乎絕大多數(shù)植物都能合成黃酮類。近年來，人們對(duì)類黃酮化合物的抗氧化功能和機(jī)理進(jìn)行了比較深入的研究，證實(shí)該類化合物是一種很強(qiáng)的活性氧自由基清除劑。迄今已發(fā)現(xiàn)了 2000 多種黃酮類化合物，它們多數(shù)以甙的形式存在，少數(shù)以游離形式存在。黃酮類化合物泛指具有 C6－C3－C6 基本骨架的化合物，包括黃酮、黃酮醇、異共同酮、查爾酮及它們的二氫衍生物和黃烷醇等。主要有本犀草素、蘆丁、橘皮色素、紅花黃色素、原花青素等。
類黃酮色素的分離純化方法
天然黃酮類色素多有酚羥基取代，因此是極性較強(qiáng)的化合物。按照相似相溶原理，可溶于極性化合物，所以對(duì)天然黃酮類色素的提取一般用甲醇、乙醇、丙酮水溶液等極性溶劑。
對(duì)于花色素類用酸性極性溶劑提取，以保持它的穩(wěn)定性。?
柱層析是分離純化天然黃酮類化合物的一種主要工具。以前的研究中通常用聚酞胺、硅膠、氧化鋁等做填充料，由于這些材料吸附量大，前處理煩瑣，回收率低等缺點(diǎn)，現(xiàn)極少應(yīng)用。對(duì)于酚類化合物的分離純化現(xiàn)階段普遍使用的填充料是交聯(lián)葡聚糖凝膠。
LH‐20(SePhadexLH‐20)分離黃酮類色素特性如下:?
交聯(lián)葡聚糖凝膠是一種高度交聯(lián)的葡聚糖，在它上面可以根據(jù)分子篩效應(yīng)將物質(zhì)，以分子大小遞減的次序洗脫得以分離。其中羥基丙醇葡聚糖凝膠(即 SePhadexLH‐20)是通過葡聚糖與甘油聚合，在分離花色素、黃酮類化合物得到了成功的應(yīng)用。?
Sephadex LH‐20 是羥基丙醇葡聚糖凝膠，適用于純化一些植物次生代謝產(chǎn)物，不但具有分子篩效應(yīng)，還可以在極性與非極性溶劑組成的系統(tǒng)中起反相層析的作用，所以，它結(jié)合了凝膠、分配色譜、吸附層析于一身，能分離結(jié)構(gòu)相近的分子。Sephadex LH‐20 有較強(qiáng)的吸附能力和分辨能力，以水一乙醇為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，反復(fù)分離，可以對(duì)花色素、多聚體花色素進(jìn)行比較單一的分離。?
? ? ? ? 用 Sephadex ?LH‐20 分離黃酮類化合物的機(jī)理是:分離黃酮苷元時(shí)，主要是吸附起作用，分離次序取決于游離酚羥基的數(shù)目;分離黃酮苷時(shí)，分子篩起作用，相對(duì)分子質(zhì)量的大小或含糖的多少?zèng)Q定化合物被分離的次序。黃酮昔元游離酚羥基越多，越難以洗脫，相對(duì)分子量越大，苷元上連接的糖越多，越容易洗脫。?
在前處理上，SePhadexLH‐20 可以用有機(jī)溶劑溶脹而不影響它的溶脹度，在分離樣品時(shí)改變洗脫的極性。當(dāng)分離結(jié)束后，再用大量水一丙酮(l:l)沖洗，可以吸附再生后重復(fù)使用，分離效果保持十幾年不變。 ??
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