第119期連續(xù)流層析在血液制品純化的應(yīng)用

2019年05月21日source：管理員

血液制品是指從人體血漿中分離提取出的各種人血漿蛋白制品，主要包括人血白蛋白、免疫球蛋白、凝血因子和其他蛋白成分。

血液制品分離需采用低溫乙醇沉淀分離法，各種蛋白在不同的條件下分步從溶液中析出。各組分精制則需采用層析方法，主要包括親和層析和離子交換層析。

『Capture SMB應(yīng)用于親和層析』

傳統(tǒng)親和層析工藝，由于流穿效應(yīng)，有40-60%的填料是無法被利用的，從而使得載量和處理量大為受限。Capture SMB用于優(yōu)化捕獲環(huán)節(jié)，作為最簡(jiǎn)單和最強(qiáng)大的2柱位設(shè)計(jì)，可使純化效率顯著提高，并且使填料用量大為縮減。

Capture SMB是在第一根層析柱出現(xiàn)樣品流穿時(shí)，繼續(xù)上樣至第二根層析柱，待第一根層析柱完全滿載后，方結(jié)束其上樣，進(jìn)行洗脫、清洗等操作，而此時(shí)第二根層析柱仍繼續(xù)上樣。通過切換柱位操作，保證2根層析柱的洗脫、再生、上樣等操作交替銜接進(jìn)行，保證連續(xù)上樣，從而實(shí)現(xiàn)工藝與系統(tǒng)硬件設(shè)計(jì)的完美結(jié)合，使填料利用率最大化，純化效率顯著提高。

從預(yù)處理血漿中捕獲AT-III通常采用肝素親和層析法。將單柱Batch工藝與Capture SMB進(jìn)行對(duì)比實(shí)驗(yàn)，使用親和填料TOYOPEARL? AF-Heparin?HC-650M，用血漿上清液（AT-III：0.08-0.24 g/L）進(jìn)行上樣，采用TSKgel Heparin-5PW分析柱進(jìn)行濃度測(cè)定，最終研究表明，采用Capture SMB，可使填料載量提高45%，產(chǎn)率提高38%，同時(shí)使緩沖液消耗量降低29%。

『MCSGP應(yīng)用于離子交換層析』

MCSGP（Multi-column Counter-current Solvent Gradient Purification）是采用雙柱進(jìn)行連續(xù)純化，可以解決單柱層析時(shí)純度和收率無法同時(shí)保障的問題。

采用MCSGP，可將含有不純組分的產(chǎn)品回收再純化，進(jìn)行循環(huán)式的層析操作，從而最大限度地提純產(chǎn)品，使得純度和收率二者兼得。

從血漿中純化AAT需采用DEAE離子交換層析，有研究表明，采用單柱Batch工藝純化AAT，產(chǎn)品純度76.7%時(shí)，收率為33.4%；產(chǎn)品純度65.0%時(shí)，收率為86.5%，純度和收率此消彼長(zhǎng)。采用MCSGP工藝后，可在產(chǎn)品純度76.1%時(shí)，仍保證收率為86.7%。